第一屈令固币米有害生物控制技术学术研讨会论文摘要集玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因与色素相关基因相互关系研究荆晶，刘铜ng28南宫娱乐注册， 范莉莉， 刘力行・， 陈捷・（ 上海交通大学农业与生物学院， 农业部都市农业（ 南方）重点开放实验室）玉米弯孢霉叶斑病菌（ Ｃ ｕ ｒｖ ｕ ｌａ ｉｒａ ｌｕ ｎ ａ ｔａ ）产生的毒素和黑色素均是重要的致病因子， 因此研究毒素合成相关基因Ｃ ｌｔ． １和黑色素形成相关基因Ｂ ｍ ｌ的相关系， 有助于更全面揭弯孢霉叶斑病菌的致病机理。 根据已知的Ｂ ｍ ｌ基因序列作为探针， 通过Ｓ ｏ ｕ ｔｈ ｅｒ ｎ ｂ ｌｏ ｔｔｉｎ ｇ 确定了Ｂ ｍ ｌ基因以单或多拷贝的形式存在于基因组中， 为此， 以质粒ｐ Ｓ ｉｌｅ ｎ ｔ． １为基础构建了Ｂ ｍ ｌ基因的Ｒ Ｎ Ａ 干扰载体ｐ Ｓ ｉｌｅｎ ｔＢ ｍ ｌ． ２， 并利用原生质体． 氯化钙． 聚乙二醇（ Ｃ ａ Ｃ ｌ２． Ｐ Ｅ Ｇ ）转化方法获得了１０ 个抗潮霉素的转化子， 其中转化子Ｔ ２、 Ｔ ４ 、 Ｔ ５在菌丝颜色上表现出不同程度的白化现象。 通过转化子Ｓ ｏ ｕ ｔｈ ｅ ｒ ｎｂ ｌｏ ｔｔｉｎ ｇ 和Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ 验证， 发现其干扰载体ｐ Ｓ ｉｌｅｎ ｔ． ｂ ｍ ｌ中Ｂ ｍ ｌ基因序列的发央结构已经整合到基因组中。

在三个干扰予中， Ｂ ｍ ｌ基因表达有不同程度的抑制， 其中转化子Ｔ ５中Ｂ ｒ ｎ ｌ基因表达被沉默程度达７ ９ ％， 菌落表现红棕色， 边缘出现白化， 表明Ｄ Ｈ Ｎ 黑色素合成过程中受阻。 另外， 通过Ｔ Ｌ Ｃ 检测发现Ｔ ５不能够产生所鉴定的毒素分子—（ 甲基． （ ５羟甲基）呋喃． ２． 羧酸盐）。 综上述表明： Ｂ ｍ ｌ基因不仅是弯孢霉叶斑病菌黑色素合成途径中关键基因，而且还参与了毒素合成代谢的调控。 为了进一步明确两基因是否存在直接的互作关系ng28南宫娱乐官网， 本研究正在利用酵母双杂交方法进行研究。 已开展工作如下： 以玉米弯孢霉叶斑病菌野生菌株Ｃ Ｘ － ３为试验材料， 收集生长两天的菌丝提取总Ｒ Ｎ Ａ ， 通过Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ 得到ｃＤ Ｎ Ａ ， 以此为模板用高保真酶扩增出Ｂ ｍ ｌ和Ｃ ｌｔ－ １目的片段， 加Ａ 尾后做Ｔ － Ａ 克隆， 转化感受态大肠杆菌Ｄ Ｈ ５ａ ， 做菌落Ｐ Ｃ Ｒ 后并将阳性菌种保存。 进一步验证是否连上Ｔ 载体， 即提取质粒后进行酶切， 发现目的片段后进行测序， 测序结果正确， 于是将质粒与相应载体分别酶切基金项目： 国家自然科学基金项目（ ３０ ８ ７ １６ １０ ）； 国家９ ７ ３项ｉ： ｔ（ ２０ ０ ６ Ｃ Ｂ ｌ０ １９ ０ １）； 国家科技丈撑（ ２ ０ ０ ６ Ｂ Ａ Ｄ ０ ８ Ａ ０ ６ ）第一作者： 荆晶， 硕上生， 女， 主要从事玉米病害分子生物学研究－ Ｔ 作。

Ｅ —ｍ ａ ｉｌ： ｊｉｎ ｇ ｓｈ ａ ｏ ｗ ｕ ２０ ０ ７ ＠ １６３． ｃｏ ｉｎ共同第一作者： 刘铜， 博十，男ng28南宫国际app下载， 主要从事玉米病害发生分了机理研究． Ｔ 作。 Ｅ － ｍ ａ ｉｌ： ｌｉｕ ｔｏ ｎ ｇ ａ ｍ ｙ ＠ ｓｉｎ ａ ． ． ｃｏ ｍ・通讯作者： 陈捷， 教授， 博上生导师， 主要从事玉米绢害发生与抗性机理研究工作。 Ｅ ． ｍ ａ ｉｌ：ｊｉｅｅｈ ｅｎ ５９＠ ６ｓｊｔｕ ． ｅｄ ｕ ． ｇ ｎ・共同通讯作者： 刘力行， 副研究员， 硕士生导师， 主要从事植物病理学研究工作。 Ｅ － ｍ ａ ｉｌ： ｌｉｘ ｉｎ ｌｉｕ ＠ ｓｊｔｕ ． ｅｄ ｕ ． ∞一４ 一